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银杏叶提取物对老化红细胞膜ATP酶、SOD和MDA影响

【摘要】 目的 观察银杏叶提取物(EGb761)作用下老化红细胞膜三磷酸腺苷酶(ATPase)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化，探讨EGb761抗衰老的机制。方法 采用恒温水浴箱孵育法模拟红细胞的自然衰老过程，观察EGb761对老化红细胞膜MDA含量、SOD和ATPase活性的影响。结果 与衰老组比较，EGb761组的红细胞MDA含量明显降低，SOD、ATPase活性明显升高，差异有极显著意义(t=2.02~70.06，P<0.05、0.001)。结论 EGb761能提高红细胞的抗氧化能力，保护红细胞膜蛋白，减缓红细胞的老化过程。

【关键词】 银杏叶提取物 红细胞膜 超氧化物歧化酶 丙二醛

[ABSTRACT]ObjectiveTo observe the effects of Ginkgo biloba extracts (EGb761) on erythrocyte survival, and explore the protective mechanism of EGb761 on erythrocyte.MethodsAfter 24 hours’ incubation in thermostatic waterbath, the concentration of the product of erythrocyte lipid peroxidation-malondialdehyde (MDA) and the activity of superoxide dismutase (SOD) and ATPase in RBC were measured.ResultsCompared with the aging group，EGb761 could significantly decrease the erythrocyte MDA concentration and improve the activity of SOD and ATPase (t=2.02-70.06;P<0.05,0.001).ConclusionEGb761 can directly resist the erythrocyte membrane lipid peroxidation injury from aging.

[KEY WORDS]Ginkgo biloba extracts; Erythrocyte membrane; Superoxide dismutase; Malondialdehyde

近年来，国内外对于银杏叶提取物(EGb761)进行了全方位的研究，关于其主要活性成分银杏叶黄酮和银杏内酯的药理作用研究已卓有成效，其对心脑血管和中枢神经系统的保护作用已得到各国医学界的认可[1]。其中内酯的PAF特异性受体拮抗作用和黄酮类化合物的抗氧化及自由基清除作用近年更受学者们的青睐，是人们关注的焦点[2~4]。本文采用37 ℃恒温水浴箱孵育法模拟红细胞的自然衰老过程，观察EGb761对老化红细胞脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和红细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)活性的影响，以探讨EGb761在体外对脂质过氧化损伤引起的红细胞老化的影响及其减缓红细胞老化的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

紫外线分光光度计UV-260由CO-PARMEK USA生产;银杏叶提取物(商品名金纳多针剂，内含EGb761)由德国威玛舒培博士药厂生产;电热恒温水浴箱由北京医疗设备厂生产;磷酸盐、Na2EDTA等均为国产分析纯试剂;JSM-840扫描电镜、JEM-1200EX透射电镜由日本JEOL公司生产。

1.2 方法

1.2.1 老化红细胞制备 取40例年龄20~61岁的健康成年人肘静脉血，肝素抗凝,4 ℃下2 500 r/min离心5 min,除去血浆和灰白色的白细胞层。按1∶2 左右的比例加入PBS磷酸盐缓冲液(磷酸盐5 mmol/L，氯化钠150 mmol/L，pH 7.40), 混匀后2 500 r/min 离心5 min，吸去上清液及白细胞层,换洗、离心,重复3次,最后加PBS磷酸盐缓冲液配成体积分数为0.05(红细胞计数为5.56×1013/L)的红细胞悬液。实验分成3组：对照组、单纯衰老组、EGb761保护组。

1.2.2 红细胞膜ATPase、SOD活性及MDA含量的测定 采用南京建成生物工程研究所提供的ATP酶试剂盒进行检测。

1.3 统计学处理

实验数据均以x±s表示，采用PEMS医学统计学软件对样本均数进行t检验。

2 结 果

模拟红细胞的自然衰老过程，37 ℃孵育24 h后，单纯衰老组红细胞在老化作用下SOD、Na+，K+-ATPase和Ca2+，Mg2+-ATPase活性均明显降低，MDA含量明显增高，与对照组红细胞相比差异有显著性(t=24.17～116.98，P<0.05)。EGb761保护组衰老红细胞的SOD、Na+，K+-ATPase和Ca2+，Mg2+-ATPase活性与单纯衰老组相比显著升高，差异有统计意义(t=60.06～75.11，P<0.05)，但显著低于对照组(t=15.33～49.33，P<0.05);红细胞MDA含量与单纯衰老组相比明显降低，差异有统计意义(t=30.19，P<0.05)，但仍高于对照组(t=11.68，P<0.05)。见表1。 表1 EGb761对自然衰老红细胞MDA、SOD、Na+，K+-ATPase和Ca2+，Mg2+-ATPase的影响

3 讨 论