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委陵菜抗糖尿病有效成分分离工艺的研究

【摘要】 　　目的研究中药委陵菜中抗糖尿病主要活性成分委陵菜黄酮的分离纯化工艺。方法通过不同大孔吸附树脂和聚酰胺的分离性能考察和各种分离参数优化，确立分离工艺。结果选用AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺色谱对委陵菜乙醇提取物进行分离，得到委陵菜黄酮组分。结论该方法稳定可行，适用于中药委陵菜中抗糖尿病活性成分的分离。

【关键词】 委陵菜; 委陵菜黄酮; 分离工艺

Abstract：ObjectiveTo study the technological parameters of isolation of anti-diabetes constituents, potentilla flavone from Potentilla chinesis.

MethodsThe separation process was established through evaluation of separation performance and the optimal separation conditions of macroporous absorption resin and polyamide.ResultsAB-8 Macroporous Resin and polyamide were chosen for isolation and purification from Potentilla chinesis. ConclusionThe extraction process is stable and suitable for industry.

Key words： Potentilla chinesis; Potentilla flavone; Isolation process

中药委陵菜Potentilla chinesis Ser.又名白头翁、蛤蟆草、天青地白，属蔷薇科委陵菜属，为多年生草本，在《中国药典》2000～2005年版中均有记载，临床上多以其单方或复方治疗糖尿病。本实验室在前期委陵菜糖尿病有效成分的研究中，得到一个具有明显降血糖活性的单体化合物-委陵菜黄酮，进一步药理毒理考察表明其作为降血糖候选药物，具有良好的开发应用前景[1]，并确定了委陵菜黄酮的提取工艺，本文将考察委陵菜黄酮的分离工艺。

1 仪器与试剂

旋转蒸发器：SENCOR系列，上海申生科技有限公司产品;电子分析天平：FA2004N型，上海恒平科学仪器有限公司产品;KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品;DZX-3型真空干燥箱，上海福玛实验设备有限公司产品;DLSB-5/20低温冷却液循环泵，上海豫康科教仪器设备有限公司产品;SSI Lab AllianceTM 高效液相色谱系统。

甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，购自天津基准化学试剂有限公司。

D-101、AB-8大孔吸附树脂，精品级，20～60目，天津海光化工厂产品;聚酰胺80-100目，上海天莲精细化工有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 静态吸附与解吸[2]

2.1.1 静态吸附称取适量委陵菜提取物，以40%乙醇溶液溶解，定容至50 ml，加入已处理好的柱填料(AB-8、D101树脂，聚酰胺)5 g(湿重)，每隔30 min振荡30 s，持续2 h，静置24 h，过滤，滤液以甲醇定容至100 ml，以HPLC法测定委陵菜黄酮含量，然后浓缩至干，干燥，称重。计算委陵菜黄酮及提取物吸附量。

2.1.2 解吸将静态饱和吸附树脂加入95%乙醇50 ml，每隔30 min振荡30 s，持续2 h，滤出溶液，以95%乙醇淋洗两次，滤液定容至100 ml，测定委陵菜黄酮的含量，然后浓缩至干，真空干燥，称重。计算提取物解吸率和委陵菜黄酮解吸率。结果见表1。表1 静态吸附与解吸(略)

2.2 动态吸附与解吸[3]称取已处理好的柱填料50 g(湿重)，湿法装柱，以40%乙醇配置适量提取物样品溶液150 ml上样，先以2倍量柱体积50%乙醇冲洗，再依次用70%，95%乙醇洗脱(流速1.5B V/h)，分别测定各洗脱溶液中委陵菜黄酮的含量和精密称定洗脱提取物的质量，计算提取物和委陵菜黄酮的动态吸附量和洗脱率。结果见表2。表2 动态吸附与洗脱(略)

从结果中可以发现，虽然聚酰胺对提取物的吸附量远高于其余两种树脂，但对提取物的洗脱率则很低。AB-8树脂与D101比较，D101黄酮洗脱率较高，但是黄酮吸附量和吸附样品中黄酮含量仅为AB-8的1/2，从分离纯化角度考虑，选择AB-8树脂较好。

2.3 AB-8树脂柱洗脱条件考察[4]