在上述最佳条件下进行3次重复实验。结果见表3。表3 最佳条件验证实验(略)

从表3可看出，最佳提取工艺条件具有较好重复性，说明该最佳工艺条件是合理、可靠的。

2.6 方法学考察

2.6.1 标准曲线的绘制精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，配制成100.4 μg/ml的标准贮备液，精密量取1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00 ml置50 ml量瓶中，定容后作为葡萄糖标准溶液。在具塞试管中依次加入不同浓度的标准葡萄糖溶液1 ml，加苯酚溶液1.0 ml，摇匀后加浓硫酸5.0 ml，摇匀，沸水浴15 min，冰水浴冷却至室温后，用蒸馏水做空白参比，于487 nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=9.311C +0.000 4 ( r = 0.996 5)。结果表明葡萄糖溶液在20.1～120.3 μg/ml范围内线性关系良好。

2.6.2 稳定性实验

取同一份供试品溶液，按“2.6.1”项下方法分别显色，于0，10，30，60，90，120 min时测定吸光度。测定吸光度在120 min内RSD=0.43%，表明供试品溶液在120 min内吸光度稳定。

2.6.3 精密度实验

取同一份供试品溶液6份，按“2.6.1”项下方法分别显色，测定吸光度。显色的结果RSD=1.99%，表明方法的精密度符合测定要求。

2.6.4 加样回收率实验

精密称取已知多糖含量的样品6份，分别加入葡萄糖，按样品测定方法制备供试品溶液并测定吸光度值，计算加样回收率。本法加样回收率为97. 9%～105. 2%，平均回收率为101. 0%，RSD=2. 63%(n=6)。结果表明该方法的准确度较高。

3 讨论

提取条件实验采用正交实验方法，对西归多糖的提取条件进行了优化。由正交分析结果可知该多糖提取中，温度是主要影响因素，其次是固液比，提取次数和提取时间影响。因此在提取时应注意控制提取温度和固液比，该工艺条件简单，稳定可行，多糖稳定性好，可作为总多糖的提取工艺条件，为有效开发利用西归提供了理论参考。

苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量的原理是多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙黄色溶液，该溶液在特定波长处和一定浓度范围内，吸收度值与浓度呈线性关系[5]。本文利用苯酚——硫酸法测定了西归的主要活性成分——多糖，为西归进一步开发及其多糖生物学活性研究奠定基础。

【参考文献】

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志，第55卷，第一分册[M].北京：科技出版社，1979：185.

[2]周 浓，段意梅，陈 强，等.白族药西归的生药学鉴定[J].安徽农业科学，2007，35(8)：2307.

[3]张维明，段志红，孙 凤，等.西归的化学成分研究[J].天然产物研究与开发，2004，16(3):218.

[4]姜曼花，邱细敏，刘胜姿，等.白背三七多糖的提取纯化及含量测定[J].时珍国医国药，2008，19(9)：7412.

[5]韩燕全，黄正明，杨新波，等.苯酚-硫酸法测定不同工艺六味地黄口服液中多糖的含量[J].解放军药学学报，2008，24(4)：349.

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