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西归中多糖的提取及含量测定

【摘要】 　　目的研究西归多糖的提取工艺并测定多糖的含量。方法通过正交实验确定最佳提取工艺，苯酚-硫酸法测定西归总多糖含量。结果最佳提取工艺为提取次数3次，固液比1∶10，提取时间1 h，提取温度90℃。西归总多糖含量为32.71%。结论该提取工艺合理，测定方法准确。

【关键词】 西归; 多糖; 苯酚-硫酸法

西归是伞形科属植物西藏凹乳芹Vicatia thibetica de Boiss.的干燥根[1]，主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地。西归在云南大理有悠久的栽培历史，在大理等地常作为滋补蔬菜炖肉、炖鸡等食用，鲜品也可生吃, 风味独特[2]。西归含有较多的糖醇和糖[3]。多糖( polysaccharide) 是构成生命的四大基本物质之一，多糖在增强免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面发挥着生物活性作用。因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的广泛关注[4]。有关西归中多糖的研究尚未见文献报道。本文对西归中多糖的提取工艺和含量进行了研究，为合理开发、综合利用西归资源提供了切实可行的工艺路线。

1 仪器与材料

1.1 仪器SY-21型电热恒温水浴箱(北京泰克仪器有限公司)，TU-1800SPS紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，FA1004-53423电子天平(上海天平仪器厂)，离心机，真空冷冻干燥机等。

1.2 药材与试剂

葡萄糖、乙醇、苯酚、硫酸、氯仿、正丁醇均为AR级。西归购自云南省大理州鹤庆县马厂乡，经本院生药教研室周浓老师鉴定为西藏凹乳芹Vicatia thibetica de Boiss.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 多糖的提取及换算因子测定

2.1.1 西归多糖的提取与精制

称取西归粗粉50 g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约80 ml时，用Savage法除蛋白，即是向浓缩液中加入1 /5 V的氯仿和1 /25 V的正丁醇，强烈振摇30 min，以3 000 r/min离心15 min，除去交界处变性蛋白，水层仍按照此方法反复除蛋白，直至氯仿层与正丁醇层之间无白色沉淀。然后在上清液中加入一定量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，静置过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多次，沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48 h，得灰白色粉末状的粗多糖。

2.1.2 多糖换算因子测定取粗多糖20 mg，精密称定，分别加水溶解并定容至100 ml，精密量取1.0 ml，按标准曲线绘制方法操作，利用标准曲线计算单糖浓度， 按公式f=WC×D计算换算因子f [W为多糖的重量(mg)，C为溶液中单糖的浓度(mg/ml )，D为稀释倍数]。测得西归多糖的f=0.986 3(RSD=1.84%，n =6)。

2.2 样品多糖的测定取干燥样品粉末1 g，精密称定，至圆底烧瓶中，精密加蒸馏水10 ml，90℃回流提取3次，1 h/次，滤过，滤液定容至100 ml，精密量取续滤液1.0 ml，按标准曲线绘制方法操作，测定其吸光度，按公式计算：多糖含量(%)=C×D×fW×1 000×100%[C为样品溶液的葡萄糖浓度(mg/ml)，D为样品溶液的稀释倍数，W为样品的重量(g)，f为换算因子]。

2.3 苯酚试剂的制备取100 g苯酚，加入0.1 g铝片和0.05 g碳酸氢钠，在180～182℃蒸馏，空气冷凝，得白色针状苯酚结晶。称取5 g此结晶于100 ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，避光保存，即得浓度为5%的苯酚试剂。

测定波长的选择：用一定浓度的葡萄糖标准溶液和供试品溶液各1.0 ml置具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0 ml摇匀，然后加入浓H2SO4 5.0 ml，摇匀，另以1.0 ml蒸馏水作为空白液同上操作，沸水浴中恒温15 min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长200～800 nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在487 nm波长处均有最大吸收，故选用487 nm为检测波长。

2.4 正交实验根据有关资料报道，提取次数(A)，固液比(B)，提取时间(C)，提取温度(D) 4个因素，每个因素3个水平，选用L9(34)正交实验方案提取西归多糖，以多糖含量为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表1，正交实验结果见表2。表1 西归多糖提取实验因素水平，表2 L9 (34 )正交实验结果(略)。

由正交实验数据可以得知，各因素对西归总黄酮含量的影响程度不同，其影响大小依次为：D(提取温度)>B(固液比)>A(提取次数)>C(提取时间)。其最佳提取条件为：A3B1C2D2，即提取次数3次，固液比1∶10，提取时间1 h，提取温度90℃时，提取效果最好。

2.5 最佳提取工艺验证