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浅谈HPLC法测定复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量

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2013-12-13

  精密吸取五味子甲素对照品贮备液 (0.402 mg・mL-1) 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL,置5 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别取上述对照品溶液各10 μL进样,按上述色谱条件测定,以峰面积(A)为纵坐标,进样量(m)为横坐标,进行线性回归,得回归方程A=1 194 733m+59 047,r=0.999 6。其线性范围为0.402~6.432 μg,结果表明在此范围内呈良好的线性关系。 5 精密度试验

  取上述对照品溶液10 μL,重复进样6次,测定,其RSD=0.75%(n=6)。 6 稳定性试验

  取上述对照品溶液10 μL,分别在0、2、4、6、8、12 h进样测定,其RSD=0.98%(n=6),表明样品在12 h以内是稳定的。 7 重复性试验

  取供试品(批号:20050201)6份,每份约4 g,按“23”项下方法制备并测定,测出五味子甲素平均含量为15.3 mg・g-1,RSD=1.21%(n=6)。 8 加样回收试验

  取已知含量供试品(批号:20050201,含量15.3mg・g-1),加入定量的五味子甲素对照品溶液,依样品测定项下的方法测定,计算其回收率=99.27%,RSD=1.02%(n=6),结果见表1。表1 回收率测定结果(略) 9 样品测定

  分别吸取对照品和供试品溶液各10 μL,按上述方法测定供试品中五味子甲素含量,其结果(n=3)为:批号20050201为15.3 mg・g-1、批号20050202为14.2 mg・g-1、批号20050203为16.5 mg・g-1和批号20050204为13.7 mg・g-1。

  3 讨 论 1 本品由灵芝、五味子等4味药材组成,曾经对灵芝所含腺苷等成分进行测定[1],但其含量较低(低于0.01%),干扰严重,不宜作为指标成分;结果选用五味子中的五味子甲素作为定量指标,用HPLC法测定其含量,结果阴性无干扰,且方法稳定可靠,专属性强,重复性好。 2 测定时应注意掌握好样品前处理,曾经采用索氏提取[2],加热回流,超声提取对样品进行处理,结果以超声提取两次较为完全,操作简单快捷。 3 经过比较不同比例的甲醇水(65∶35)、(75∶25)、(85∶15),乙腈-水-冰醋酸(70:30:0.1)[3]等流动相系统对本品中五味子甲素与杂质的分离度与保留时间,发现流动相甲醇水(75∶25)能保证所测本品与杂峰完全分离(分离度R≥1.5),色谱峰形对称而尖锐(拖尾因子 T=1.00)

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