4.下调TMPRSS4诱导SW480细胞凋亡SW480细胞株转染TMPRSS4siRNA后孵育48h,收集细胞,用AnnexinⅤ/PI双染色法检测细胞周期,si组细胞凋亡比值为14.0%,而空白对照组和NC组分别为10.4%和10.1%,有统计学差异(P<0.05)。提示下调TMPRSS4可能有诱导结肠癌细胞凋亡的作用。
    5.siRNA干扰TMPRSS4表达显着影响SW480细胞的迁移能力采用siRNA处理SW480细胞后,进行细胞划痕及transwell迁移试验。结果显示,si组的SW480细胞在划痕试验中的运动能力比对照组显着降低(P<0.05);si组在transwell试验中的穿膜细胞数亦比对照组显着降低(P<0.05)。
    四、讨论
    Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶是一类新近发现的特殊蛋白酶,具有明显的组织表达特异性,且与耳聋、贫血、高血压和肿瘤等的发生相关。本研究探讨该家族成员TMRPSS4在结肠直肠癌组织中的表达及其对增殖、凋亡、迁移等方面的影响。采用siRNA干扰TMPRSS4表达后,发现肿瘤细胞的增殖能力减弱,同时细胞运动迁移能力也降低,这与Jung等先前的研究结果相一致。针对该蛋白质的其他研究表明,TMPRSS4可能通过作用于细胞间黏附分子或激活其他蛋白酶在组织发育和细胞分化中发挥重要作用;并通过发挥其蛋白酶的水解作用裂解病毒表面的红细胞凝集素,促进病毒在肺部的扩散而致病。因此,推测该基因可能通过靶向作用于细胞外基质及细胞-细胞间连接分子而在调控SW480细胞的增殖及迁移中发挥作用,具体机制尚有待后续研究来揭示。同时,流式细胞凋亡检测显示,在siRNA干扰后,SW480细胞的凋亡比例明显增加,这与干扰后细胞的增殖能力降低相一致,表明敲除TMPRSS4基因可能通过诱导细胞凋亡而抑制增殖。最近有研究表明,乳腺癌中TMPRSS4表达与淋巴结转移、病理分期差、肿瘤体积大以及总生存率和无病生存率低相关。本研究初步显示,TMPRSS4在结肠直肠癌组织和转移淋巴结中有不同程度表达,且转移淋巴结染色强度略高。因此,有必要进一步探讨TMPRSS4与结肠直肠癌病理分期、分级、淋巴结转移及病人预后间的相关性,为其作为预后预测因素提供依据。我们将继续探讨TMPRSS4对于结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭方面的具体作用机制,揭示这一基因对于结肠直肠癌发生、发展的作用。

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