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HPLC法测定镇咳宁颗粒中白花前胡甲素的含量

【摘要】目的 建立复方制剂镇咳宁颗粒中白花前胡甲素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法采用phenomenexluna C18色谱柱，乙腈-水梯度洗脱;检测波长：321nm;柱温：26℃。结果 白花前胡甲素在0.185ug～3.7ug范围内线性关系良好，r=1;回收率99.62%，RSD为0.37%。结论 本测定方法简便可行、重复性好，可用于本制剂中的质量控制。

【关键词】镇咳宁颗粒 白花前胡甲素 含量测定

镇咳宁颗粒由前胡、紫菀、枳壳等多味中药组成，具散风清热，化痰止咳之功。用于治疗风热咳嗽，痰多，喘满等症状。前胡为方中君药，具有散风清热、降气化痰等功效，其主要含有多种类型的香豆素及其糖苷[1]，文献报道白花前胡甲素是前胡药材的代表性成分[2-4]。本方参照药典[5]选用白花前胡甲素作为指标成分，采用HPLC法测定白花前胡甲素的含量。

1 仪器与试药

Aiglent 1100高效液相色谱仪(美国Aiglent公司，配有自动进样器，柱温箱，二级管陈列检测器(DAD)，四元(型号)泵，Aiglent-Chemstation 化学工作站。

镇咳宁颗粒(批号：20080115、20080116、20080117)，由广州中医药大学新药开发研究中心提供;阴性对照样品(自制) ;白花前胡甲素(供含量测定用，110753-200413)，由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，液相用水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5um)为固定相;流动相乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表进行梯度洗脱(表1);流速：1mL/min;检测波长为321nm;柱温：26℃;进样量：10uL。在该色谱条件下，白花前胡甲素峰可达基线分离，其它药材成分对测定无干扰，结果见图1。

表1 流动相梯度洗脱时间表

白花前胡甲素对照品 复方供试品 缺前胡阴性对照

图1 HPLC 色谱图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取白花前胡甲素对照品适量，加甲醇溶解定容，制成浓度为0.185mg/mL的白花前胡甲素对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取样品适量，研细，取细粉0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入80%乙醇50ml,称定重量,超声处理(250W，40kHz)30分钟, 放冷，再称定重量,用80%乙醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜滤过, 取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1,2,4，8,l0,l2,16,20uL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样质量(X，ug)对峰面积(Y，mAu.Sec)进行线性回归，求得回归方程为：Y=1095.7X-1.4585，r=1，线性范围0.185ug～3.7ug。(见表2)

表2 白花前胡甲素标准曲线的测定

2.5 精密度试验