3.3.1 专属性实验：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件检测，在待测成分保留时间处，阴性对照无其他成分干扰，结果表明，测定方法专属性强，无干扰，结果见图4。

3.3.2 线性关系考察：分别精密吸取对照品1、2、4、6、8、10μL溶液， 注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.1132～1.132μg范围内，呈良好的线性关系。

3.3.3 精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样，连续测定6次，记录峰面积，RSD值2.13%，表明精密度良好，符合含量测定要求。

3.3.4 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后0，2，6，12，24 h后依法测定连翘苷的峰面积，结果2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积RSD为0.73% ，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

3.3.5 重复性试验：取同批样品，依法平行制备6份，分别测定2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值为1.03%，结果表明供试品制备方法重复性良好，符合含量测定要求。

3.3.6 回收率试验：取已知含量的样品6份，每份约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中再分别加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，按供试品溶液的制备项下操作，结果见表1。

表1 回收率试验测定结果

3.3.7 样品测定：分别精密吸取供试品溶液与对照液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。结果见表2

表2 三批样品含量测定结果

4 讨论

4.1 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为何首乌的主要有效成分，参考有关文献 ，经研究对比，建立了2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定法，经方法学验证，本法重现性好、阴性对照无干扰，操作简单，便于满足工业化生产的需要，可有效控制本品的质量，为保证用药的有效性提供技术支持。

4.2 色谱条件的选择依据本文先后考察了甲醇-水、乙腈-甲醇-水，参照相关文献[2-4]最后采用乙腈-水(13﹕87)作为流动相测定连翘苷的含量，检测波长为320nm，流速为1ml/min。理论塔板数不低于3000，主峰与其他杂质峰分离度大于1.5，符合要求。

参 考 文 献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]陈彦清，张辉等.高效液相色普法测定润燥通便合剂中二苯乙烯苷含量[J].中国健康月刊，2011，30(4):391

[3]谢国芳，高敏，张利等. HPLC测定定益脑宁片中二苯乙烯苷的含量[J].现代中医药，2010，30(4):86-87

[4]廖海民，胡正海，贺定翔.制首乌中二苯乙烯苷含量的HPLC测定[J].西北药学杂志，2006，21(1)：3—4

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