研究高压氧保存对离断肢体骨骼肌的保护作用。高压氧保存对离断肢体骨骼肌的影响，其超微结构变化优于室内空气保存的离断肢体。

离断肢体肌肉的保护是否得当直接影响再植肢体成活率及功能恢复。 在 肢体的所有组织中骨骼肌对缺血、缺氧最为敏感，因此肌组织活力的维持对断肢再植的成功 起关键作用并被作为观察指标。肢体再植术后采用高压氧(HBO)治疗已被证实对此有较好效 果。H BO能逆转细胞变性，提高再植肢体的成活率〔1〕。但是有关用HBO保存离断肢体的报 道甚少〔2，3〕，本实验采用HBO对Wistar大鼠离断肢体的保存进行了研究，以探索H BO保存对离断肢体是否有保护作用。

材料与方法

1　实验动物与分组

健康Wistar大鼠36只，雌雄不限，体重为220～280g，将肢体离断后，按术后3、6、9、12、 18、24小时随机分为6组，每组6只。常规截取左、右后肢〔4〕，用湿盐水纱布包裹 ，其中右后肢置常温(22.5±2.5 ℃)室内空气中保存，左后肢置于常温(22.5±2.5℃)H B O中保存。另取6只大鼠行肢体离体后立即取材进行酶活性测定和肌组织结构的观察，作为正 常对照组。

2　高压氧操作

高压氧舱为GYQ-A-I钢制实验动物舱(九江船用机械制造厂制造)，肢体放入高压氧舱内，先 纯氧加压至0.03MPa(表压)，洗舱6～8分钟，然后开始加压，加压速率为0.02MPa/分，匀 速加压10分钟至3.0 ATA，舱内氧浓度为98%，温度为22.5±2.5℃，相对湿度为25%～65% 。稳压预定时间后，开始匀速减压，减压时间为15～20分钟。

3　检测内容

3.1　骨骼肌超微结构变化

按各时间组分别取一小块后肢胫前肌，切成1mm×1mm×3mm的五个组织块，用3%戊二醛固 定，1%饿酸进行后固定，经乙醚、丙酮逐级脱水后，用环氧树脂618纵行包埋，超薄切片， 经醋酸钠-柠檬酸钙双重染色后，应用日产JEM-2000EX型透射电镜观察。

3.2　骨骼肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性测定

按各时间组切开离断的后肢皮肤，钝性分离剔取筋膜及胫神经，切取整块小腿三头肌，立即 置入液氮中，待进行酶活性测定时，将肌组织从液氮中取出，称重后加9倍冷生理盐水，并 在冰浴中剪碎，用ZS 83-1型内切式组织匀浆器在冰浴状态下进行匀浆。匀浆时间10秒/次 ，间隙10秒，连续5～8次。取100μl组织匀浆液，按ATP酶试剂盒(南京建成生物工程研究所 生产)的使用说明逐步操作，用721-A型分光光度计在660nm处测吸光度A值。蛋白定量：用 考马斯亮蓝法参照文献进行〔5〕，酶活性以μMPi.mgProt-1.h-1表示 。

4　统计学处理

所有数值均以平均值±标准差(±s)的形式表示，用第四军医大学卫生统计学 教研室《SPLM》软件，进行t检验分析。

结果

1　骨骼肌超微结构的改变

肢体离断后在常温室内空气中保存3小时，可见线粒体肿胀，嵴紊乱 ，肌原纤维排列尚整齐 ，Z线扭曲，明带增宽，核染色质已开始凝集，肌质网扩张;而经HBO保持3小时，胞质中线 粒体轻度肿胀，肌原纤维排列整齐，明暗带清晰可见，核染色质分布均匀，核仁明显，肌质 网轻度扩张。在室内空气中保存6小时的断肢骨骼肌表现为细胞膜下水肿，线粒体明显肿胀 并有髓样小体形成，肌质网扩张明显，肌原纤维排列紊乱，部分断裂，核染色质凝集明显( 图1);经HBO保存6小时断肢骨骼肌表现为线粒体肿胀明显、嵴紊乱，肌质网扩张明显，肌原 纤维排列较整齐，明带增宽，核染色质分布较匀匀，偶见凝集、边移现象(图2)。室内空气 保存9小时，上述超微结构变化程度明显加重，表现为质膜破裂，肌丝断裂、溶解，线粒体 肿大、空化，核固缩、溶解等细胞死亡不可逆征象(图3);而经HBO保存9小时，可见线粒体 肿大、嵴紊乱，部分肌原纤维排列不整齐，核染色质凝集、边移，直到12小时才可见胞膜破 裂，线粒体肿胀空泡化，肌原纤维排列紊乱、溶解，核固缩等征象(图4)。从以上超微结构 变 化对比，发现断肢骨骼肌在HBO条件下保存明显优于室内空气中保存，HBO条件下保存12小时 的骨骼肌与室内空气中保存9小时的变化相似。