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小叶杜鹃的超临界二氧化碳提取工艺研究

【摘要】 　　目的筛选小叶杜鹃的超临界CO2提取最佳工艺条件。方法采用L9(34)正交实验，以槲皮素含量为指标进行正交实验，对小叶杜鹃的超临界CO2提取工艺进行考察。结果小叶杜鹃的超临界CO2提取最佳工艺为：取小叶杜鹃药材粗粉(过20目筛)进行萃取，萃取压力为45 MPa，提取时间为2 h，萃取温度为35℃，解析压力为5 MPa。结论运用该工艺提取效率高，稳定性较好，适合大生产。

【关键词】 小叶杜鹃; 超临界二氧化碳提取; 正交实验

小叶杜鹃系羌族药材，又名窝兰巴、黑香柴，来源于双子叶植物杜鹃花科植物头花杜鹃的叶或花，辛，温，入肺经，具止咳平喘、祛痰、暖胃止痛之功效;主治咳喘多痰，胃寒腹痛。小叶杜鹃含有多种化学成分，主要有：顺式-α-罗勒烯(cis-α-ocimene),β-古芸烯(β-gurjunene)，α-葎草烯(α-humulene)，右旋α-菠烯(α-pinene)，消旋β-蒎烯(β-pinene)，金丝桃苷(hyperin)，头花杜鹃素(capitatin)Ⅰ，槲皮素(quercetin)等[1]。本实验中采用L9(34)正交设计实验，选择影响小叶杜鹃的超临界CO2提取工艺的4个重要因素，即萃取压力、提取时间、提取温度、解析压力，每个因素设3个水平，以槲皮素含量为指标进行正交实验，从而筛选小叶杜鹃的超临界CO2提取最佳工艺。现将实验方法及结果简介如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器岛津LC-20高效液相色谱仪(日本);电子天平BP121S;槲皮素对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号为100081-200406);超临界CO2萃取设备(HA420-40-96-EX型，江苏南通华安超临界萃取设备有限公司)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

1.2 药材本实验所用小叶杜鹃药材购于成都市五块石中药材市场。

2 方法与结果

2.1 样品溶液的制备取小叶杜鹃，粉碎，过20目筛，按所选因素及水平(见表1)，采用L9(34)正交表设计实验(见表2)进行小叶杜鹃的超临界CO2提取，得1～9号萃取物，备用。表1 因素水平，表2 正交实验设计及结果(略)。

2.2 槲皮素含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥD)进行测定[2，3]。

2.2.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50);流速1.0 ml·min-1;检测波长：360 nm;柱温35℃;灵敏度0.01AUFS。在上述色谱条件下槲皮素色谱峰能达到较好分离。其结果见图1～2。

2.2.2 含量测定精密量取槲皮素对照品溶液(0.116 mg/ml)1.0，2.0，4.0，8.0，16.0 μl，按上述色谱条件进行测定，以浓度(mg/ml)对峰面积积分值(A)进行线性拟合，得回归方程：Y=4 109 365.07X-7 647.95，R2=0.999 6。分别精密称取上述1～9号萃取物适量置50 ml量瓶中，加适量甲醇，超声处理30 min溶解，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品液，测定，计算，即得。

2.3 实验结果实验结果采用中国医统软件包(PEMS)进行处理分析。结果见表3。表3 方差分析(略)

3 结论

上述结果表明，B因素有显著的影响，影响因素B>A>C>D;且B3、A3、C2、D1为最佳，故小叶杜鹃超临界CO2提取最佳工艺为：取小叶杜鹃药材粗粉(过20目筛)进行萃取，萃取压力为45 MPa，提取时间为2 h，萃取温度为35℃，解析压力为5MPa。

4 讨论

超临界流体萃取技术(SFE)是20世纪70年代发展应用起来的一种集萃取、分离于一体的萃取技术，因其可避免传统工艺收率低、有效成分损失大的缺点而得到纯度高、杂质少、无有机残留的提取物并大大缩短工艺流程，故在中草药的提取中得到广泛应用[4]。小叶杜鹃相关文献资料较少，采用超临界CO2 进行提取的相关研究尚未见报道，槲皮素为小叶杜鹃的主要有效成分之一，故本次实验以槲皮素为含量指标对小叶杜鹃的超临界CO2提取工艺进行了研究，并建立了HPLC法测定小叶杜鹃中槲皮素的方法，该法精确、重复性好，可较好地进行小叶杜鹃超临界CO2 萃取物的质量控制。

【参考文献】

[1]鞠 颖，鞠显昌，高晓红，等.小叶杜鹃的生态环境及开发利用[J].特产研究，1997，3：56.

[2]时海燕，徐春波，徐 男.浅析影响中药超临界CO2萃取的因素[J].西北药学杂志，2008，23(2)：120.

[3]周雪晴，冯玉红. 超临界CO2萃取技术在中药有效成分提取中的应用新进展[J].海南大学学报(自然科学版)，2007，25(1)：101.

[4]陈 华，张惠静. 超临界CO2萃取技术及其在中药分离提取中的应用[J].解放军药学学报，2006，22(2)：133.

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