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渔业论文8000字:微生物

编辑:sx_yangk

2016-03-01

论文的选定不是一下子就能够确定的.若选择的毕业论文题目范围较大,则写出来的毕业论文内容比较空洞,下面是编辑老师为各位同学准备的渔业论文8000字

材料与方法

1材料

氨氧化细菌样品采自实验室规模的封闭循环海水养殖系统中填充塑料环载体的硝化作用滤器。采样前14d测得的硝化作用滤器的性能指标。

2基因组RNA的提取

将适量附有生物膜的载体置于盛有150mL灭菌海水的250mL烧杯中,用磁力搅拌器搅拌。20min后采用2种方法浓缩菌体:一是过滤,用0.45μm微孔滤膜过滤、蒸馏水冲洗后置于-20℃备用;二是离心(HERMLZ323K,德国),4℃下12000r/min离心5min,收集离心沉淀物备用。RNA提取采用经典方法的改进方法。于收集的菌体中加入6μL20mg/mL蛋白酶K、2μL0.2%β-巯基乙醇、0.6mL2%CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),55℃温育1h后消化,再加入酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)混合液,完全混匀后,12000r/min离心5min。取上清于一洁净离心管中,再加入氯仿-异戊醇(24∶1)混合液混匀后12000r/min离心5min。再取上清于洁净离心管中,加入双倍量的无水乙醇,混匀后置于-20℃下20min。高速离心产物以70%乙醇洗2遍之后风干。加入适量TE后置于-20℃保存待用。

3相关基因的PCR扩增

以提取的基因组RNA作为PCR反应模板,采用巢式扩增法对氨氧化细菌16SrRNA基因及氨单加氧酶基因amoA进行PCR扩增(Eppen-dorfS,德国)。具体方法是:先采用细菌16SrRNA基因通用引物11f和1492r(表2)进行大量扩增,之后再以特异性引物Nso1225和通用引物[18]EUB338对β-亚类氨氧化细菌进行扩增;还采用氨氧化细菌amoA基因特异性引物AmoA-1F和AmoA-2R对通用引物的PCR产物进行二次扩增。

标签:渔业论文

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