提前做好规划对于做好一件事情可以较高的提高效率，下文为大家带来了高二生物多聚酶链式反应扩增DNA片段说课稿范例，欢迎大家阅读。

教学目标：

(一)知识与技能

1、了解PCR技术的基本操作

2、理解PCR的原理

3、讨论PCR的应用

(二)过程与方法

在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中，应避免外源DNA污染，严格控制温度等反应条件

(三)情感、态度与价值观

通过对PCR实验的操作及结果分析，培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神

教学重点：PCR的原理和PCR的基本操作

教学难点：PCR的原理

教学过程：

(一)引入新课

在现代生物技术中，DNA技术可谓是尖端技术。人类基因组计划、基因工程、基因诊断、基因检测、古生物鉴定等都离不开对DNA分子碱基序列的分析。而分析DNA碱基序列，就需要一定量的DNA片段。怎样迅速获得足够量的DNA片段呢?今天我们来研究学习DNA分子的扩增技术――PCR技术。

(二)进行新课

1.基础知识

PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：

1.1细胞内DNA复制条件分析：

条件 组分 作用

模板 DNA的两条单链 提供复制的模板

原料 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料

酶 解旋酶

DNA聚合酶 打开DNA双螺旋

催化合成DNA子链

能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能

引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点

1.2细胞内DNA复制过程

(1)DNA的反向平行结构：(结合投影图)

核苷酸分子的结构与方向性：(分子结构模式图)

由核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接形成核苷酸长链：(模式图，体现方向性)。

DNA双螺旋结构的反向平行结构：

(2)DNA的复制过程:

解    旋：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，，形成两条DNA单链。

引物结合：在DNA单链3’端与DNA反向配对结合，确保引物3’端与DNA单链准确配对。

DNA聚合酶结合：

子链合成：DNA聚合酶从引物3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。

后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来(半不连续合成。先导链，滞后链)

子链合成特点：不能从头合成;合成方向为“5’→3’合成”。

感悟生命的神秘：DNA聚合酶不但能够催化磷酸二酯键的形成，还具有校对功能。它在每引入一个核苷酸后都要复查一次，只有碱基配对无误后才能继续往下聚合，它不能从头合成。RNA聚合酶没有校对功能，因此RNA的合成不需要引物，而是从头合成的，它的错配可能性较大，在RNA引物完成功能后即被DNA聚合酶I删去，代之以高保真的DNA链。

[思考]DNA分子能准确复制的原因有哪些?

DNA双螺旋结构提供模板;碱基互补配对;DNA聚合酶的复查功能。

[思考]细胞内哪些物质是从头合成的?RNA合成、蛋白质合成。

1.3DNA分子复制的人工控制

解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。

恢复螺旋：在50℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。

复制条件：缓冲液,DNA模板,四种脱氧核苷酸,热稳定DNA聚合酶,两种引物。

反应场所：PCR仪(自动温度周期性调节)。

[思考]缓冲液相当细胞内的什么成分?(核基质)1.4PCR的反应过程

变性：在95℃时DNA解旋

复性：在50℃时引物与DNA单链结合

延伸：在72℃时合成DNA子链(两个引物间的序列)2.实验操作

2.1 PCR反应体系：缓冲液、DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、两种RNA引物，水

2.2 实验操作步骤

2.3 按照PCR反应体系配方配制反应液;

(2)将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管(0.5mL)中;

(3)将微量离心管放到PCR仪中;

(4)设置PCR仪的工作参数。

(5)DNA在PCR仪中大量扩增。

2.4 水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间。

3.实验注意事项

3.1避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。

3.2缓冲液和酶分装成小份，-20℃低温保存。

3.3每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。

3.4混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。

4.结果分析与评价

4.1反应液稀释：取2µLPCR反应液，添加98µL蒸馏水;2.分光光度计调零：将100µL蒸馏水添加到比色杯中，在260nm处将分光光度计调整读数为零。

4.2将100µL反应稀释液倒入比色杯中，测定在260nm处的光吸收值。

4.3计算：DNA含量=50×光吸收值×稀释倍数

(三)课堂总结、点评

(四)实例探究

例1 在(    )的温度范围内，DNA的双螺旋结构解开

A. 10-20℃       B. 80-100℃         C. 20-30℃        D. 40-60℃

解析：蛋白质大多不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。

答案：B

例2 关于DNA的复制，下列叙述正确的是(    )

A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5’端延伸DNA链

B.DNA复制不需要引物

C.引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合

D.DNA的合成方向总是从子链的3’端向5’端延伸

解析：由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3’端即复制方向由3’端向5’端延伸;由于DNA分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向是从子链5’端向3’端延伸。

答案：C

综合应用

例3 下列有关PCR描述，不正确的是(    )

A.是一种酶促反应

B.引物决定了扩增的特异性

C.扩增产量按y=(1+X)n

D.扩增对象是氨基酸序列

E.扩增对象是DNA序列

解析：PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它以极少量的DNA为模板，以四种脱氧核苷酸为原理，在引物的作用下使DNA聚合酶从引物的3’端连接脱氧核苷酸，短时间内迅速复制上百万份的DNA拷贝，其扩增产量为y=(1+X)n，y代表DNA片段扩增后的拷贝数，x表示平均每次的扩增效率，n代表循环次数，因此答案选D。

答案：D

课后探究

1、PCR与生物体DNA复制有何区别?

2、如果在案件侦破过程中，只收集到一根毛发，但它所含的遗传信息太少，该怎么办呢?

★教后小记

教师在教学过程中，可以先引导学生回忆必修2的有关DNA复制的知识，在此基础上，学生可加深对于PCR原理的认识。对于PCR反应过程的教学，应以读图识图为主。教材中反应过程图解详细的描绘了参与PCR的各种组成成分;每一轮反应的三个基本步骤—变性、复性、延伸;每一步骤的作用。教师在教学中可以请学生在读图的同时，结合教科书中的文字说明来加深理解。当学生遇到难以理解的地方时，教师要及时给予解答。

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